Чарлз Герберт Бест родился 27 февраля 1899 года в американском городе Уэст-Пембруке штата Мэн. Обучался юноша в Торонтском университете, где в 1921 году получил степени бакалавра, а затем степень магистра и доктора медицины. В годы учебы он работал на кафедре физиологии университета, а в 1929 году стал профессором и заведующим этой кафедрой.
Работая вместе с Ф.Бантингом под руководством Д.Маклеода, Бесту еще в 1921 году удалось выделить чистый гормон инсулина из поджелудочной железы собаки. В последующих экспериментах Бантинг и Бест доказали, что инсулин дает четко выраженный терапевтический эффект при введении его людям, больным сахарным диабетом.
За это открытие в 1923 году Д.Маклеоду и Ф.Бантингу была присуждена Нобелевская премия по физиологии и медицине. Бест не мог получить премию, так как в то время он был еще студентом. Не помогли и протесты Бантинга, тогда свою половину полученных премиальных денег он разделил с Чарлзом.
В период с 1922 по 1932 год Бест являлся научным сотрудником лабораторий Коннота, а затем стал их директором. Кроме того, он был доцентом кафедры медицинских исследований имени Бантинга и Беста в Торонтском университете, а в 1941 году возглавил кафедру, оставаясь на этом посту до 1967 года.
Во время Второй мировой войны Бест руководил хирургической службой Королевского канадского добровольческого морского резерва и Отделом медицинских исследований Королевского канадского флота.
За свои открытия и вклад в медицину Бест был награжден золотой медалью Старра Канадской медицинской ассоциации и медалью Бэйли Королевского медицинского колледжа в Лондоне. Он являлся членом Лондонского и Канадского королевских обществ и был президентом Канадского физиологического общества.
Выдающийся ученый, открывший инсулин и разработавший метод лечения им сахарного диабета, Бест также первым применил антикоагулянты для борьбы с тромбами. Среди трудов Чарлза, опубликованных им в различные годы – «Внутренние секреты поджелудочной железы» (в соавторстве с Бантингом), «Жизнь организма», а также учебник «Физиологические основы медицины» (в соавторстве с Бантингом).
Умер Чарлз Герберт Бест 31 марта 1978 года в Торонто (Канада).